Приготовление, фиксация мазков крови при исследовании на пироплазмидозы от домашних животных.

При исследовании на пироплазмидозы (токсоплазмоз, пироплазмоз, гемобартенелез и другие заболевания вызванные «кровепаразитами») от домашних животных исследуют цельную кровь из которой делают мазки на предметных стеклах с помощью узкого  шлифовального стекла.   

Приготовление мазков крови. Наилучшие мазки получаются из свежевзятой (нативной) крови, поэтому их надо готовить сразу же пока клетки не претерпели существенных изменений. Из крови, стабилизированной цитратом или оксалатом натрия, мазки можно приготовить в течение 6 ч после ее взятия, из гепаринизированной - в течение 24 ч. Обычно для мазков используют предварительно подготовленные предметные стекла.

Подготовка предметных стекол. Новые, не бывшие в употребление стекла промывают водопроводной воде, затем дистиллированной, высушивают и закладывают в банку с притертой крышкой, содержащую смесь (1:1)этилового эфира и этилового спирта (смесь Никифорова). Перед работой стекла извлекают пинцетом и протирают чистой сухой полотняной тряпкой. Подготовленные стекла можно хранить, сложив в пакеты по 10-20 шт. и завернув в бумагу.   

Стекла, бывшие в употребление, очищают от масла: протирают тряпкой, смоченной бензином или ксилолом, и моют щеткой в теплой мыльной воде. Помещают на 24ч в хромовую смесь (к 5 л серной кислоты прибавляют при помешивании 500,0 г бихромат калия, растертого до состояния мелкого порошка) или выдерживают 12 ч в 1-2%-м растворе бикарбоната натрия (едкой щелочи или стирального порошка) с последующим кипячением в том же растворе в течение 5-10 мин. После этого стекла моют 2 ч в проточной водопроводной воде, ополаскивают 4-6 раз дистиллированной водой, просушивают в сушильном шкафу или термостате и закладывают на хранение в смесь Никифорова.   

Техника приготовление мазка. Предметное стекло зажимают между большим и указательным пальцами левой руки. Отступя 1 см от края стекла, ближе к указательному пальцу, наносят каплю крови диаметром 2-3 мм. Это делают следующим образом: прикасаются поверхностью предметного стекла к капле крови, выступившей после прокола кожи, либо используют глазную или пастеровскую пипетку. Можно нанести каплю краем пробки, закрывающей пробирку. Затем правой рукой устанавливают в близи от капли шлифованное стекло под углом 30-450 и осторожно продвигают до соприкосновения его края с каплей крови. С помощью коротких боковых движений распределяют кровь вдоль всего ребра шлифованного стекла, которое плавно продвигают справа налево по предметному. 

Хороший мазок должен быть совершенно ровным (без перерывов, пустот) однородным, достаточно длинным, но не доходить до краев стекла, оканчиваясь в виде бахромы и, кроме того, уже предметного стекла. 

Мазки крови лучше готовить на подогретых предметных стеклах, для чего используют резиновые грелки с теплой водой(45-500), электрообогревательный столик микроскопа или стерилизатор с горячей водой, которые закрывают крышкой; на этих же приспособлениях мазки высушивают. 

В холодное время необходимо предупреждать конденсацию паров воды на мазках крови (вода может вызывать гемолиз). 

На высушенном мазке в начальной его части простым карандашом или иглой от шприца указывают номер животного и дату взятия крови. 

Фиксация мазков. Мазки крови в течение 2 дней после изготовления необходимо или зафиксировать, или окрасить, так как клетки крови на нефиксированных мазках теряют способность правильно воспринимать окраску.   

Для фиксации можно использовать метиловый спирт(5 мин.), 95-% этиловый спирт (30 мин), смесь (1:1) этилового спирта и этилового эфира(30 мин.) и др.После фиксации мазки высушивают на воздухе или в термостате.   

В случае доставки в лабораторию фиксированных мазков необходимо это указывать в сопроводительной.

Информация взята «Практикум по клинической диагностике болезней животных» под редакцией академика РАСХН Е.С.Воронина, Москва «КолосС» 2004 г.